实验计划表
导论
1 基因文库的构建
1一l 染色体DNA的提取
1-2 总RNA和mRNA的提取
1-3 λ噬菌体DNA的提取
1-4 染色体DNA的部分消化
1-5 基因组文库的构建
1-6 cDNA合成
1-7 cDNA文库的构建
2 目的基因的获得
2-1 PCR扩增
2-2 核酸电泳
2-3 目的基因片段的获得
2-4 核酸探针的标记及检测
2-5 核酸探针筛选基因文库
2-6 反转录PCR
2-7 RACE PCR
2-8 反向PCR
2-9 Sitefinding-PCR
3 载体质粒的制备
3-1 质粒DNA的提取与纯化
3-2 核酸纯度、浓度与相对分子质量的测定
4 扩增质粒的构建
4-1 限制性内切酶的酶切反应
4-2 凝胶电泳法进行DNA的分离与纯化
4-3 DNA片段的体外连接
4-4 T-A克隆
5 重组DNA导入宿主细胞
5-1 感受态细胞的制备
5-2 重组质粒的转化
5-3 外源基因在毕赤酵母中的转化与整合
6 重组子的筛选与鉴定
6-1 阳性克隆的筛选
6-2 DNA序列测定
6-3 序列同源性分析
6-4 DNA印迹
6-5 菌落原位杂交
6-6 荧光原位杂交
7 表达质粒的构建与诱导表达
7-1 表达质粒的构建与转化
7-2 RNA印迹
7-3 外源基因的诱导表达
7-4 蛋白质浓度的测定
7-5 SDS-PAGE
7-6 蛋白质印迹
8 蛋白质样品的分析
8-1 等电聚焦电泳
8-2 双向电泳
8-3 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
8-4 酶联免疫吸附测定（ELISA）
8-5 蛋白质生物功能测定
8-6 酶活性的测定
9 工程菌的培养与目的产物分离
9-1 发酵条件的优化
9-2 包含体的复性
9-3 诱导表达蛋白质的分离沉淀
9-4 凝胶过滤层析
9-5 离子交换层析
9-6 亲和层析
附录1 简写
附录2 实验注意事项
附录3 如何撰写实验报告
附录4 常用碱基、氨基酸符号及缓冲液
附录5 大肠杆菌基因型
附录6 培养基与试剂的配制
附录7 实验仪器
参考文献